把boblog升级到2.0.3,顺便测试一下office2007的新功能.据说2.0.3的放垃圾有所改善.试用一段时间吧,毕竟改程序太麻烦了,还要改模版,现在是没有这个精力咯.看来还是不太行呢,没有办法加tag,而且总是默认发布到第一个分类下,郁闷

最近买了一瓶黑占边,不知道是不是喝惯了Scotch Whisky,感觉不太习惯.价格上这瓶black Jim Beam虽然贵,不过不知道是不是因为外界的影响,还是倾向scoth whisky.

这次本来打算买Ballantine的,可惜去的时候正好卖完了,考虑到价格的因素,最后还是挑了black jim beam.等有钱了一定要尝试一下Johnnie Walker black label,听说这是世界销量第一的whisky呢.

一时心血来潮把label 5和jimbeam混合了一下,尝到的只是jimbeam的味,可能由于Bourbon Whiskey本身的味道比起来更加重的原因吧.看多了小说,感觉晚上来点whisky加上jazz的气氛很好,若是雨季的话就更赞了.

ps:最近bo-blog的垃圾非常严重,让我考虑是不是要换blog程序了,前两天一怒之下在mysql里把所有的审核引用都删除了,导致原先很多善意的回复也被清除了,算了吧,看看是不是能从以前的备份中回复评论.

这两天很偶然的从trueice上下了Diana Krall的专辑when i look in your eyes来听,感觉相当的不错,正是我比较喜欢的那类jazz,至于到底是哪类我实在是没有这个本事分辨,也不一定要深究吧.

这两天天气变得很有冬天的感觉了,还夹杂着小雨,正适合听这样的jazz音乐,非常不错,音乐和天气融和的恰到好处.看了介绍后发现原来她也是当代的歌手,不过比起诺拉琼斯早一点,现在比起后者也不太红了,当年这张专辑持续了一年的billboard第一,听起来果然不错啊.

特此推荐喜欢jazz的人尝试一下.

如果说把启动子扩增出来算是跨过一个坎的话,那么现在[碰到的cDNA又是一个坎,而且这个坎看上去更加宽更加深.

由于我这个基因比较大,有10k,又不可避免的cDNA也特别大,达到4.8k,其中万幸的是后面半段的2.6k有cDNA克隆,并且已经构建好了,但是前面的2.2k确实难上加难啊,反转录了好几次都不行,既用了oligo引物,也用了random引物,甚至用了自己设计的特异引物进行反转录,但是始终没有把前面半段的cDNA合成出来.....

由于前面的半段特别长,所以看上去使用全基因合成的方法也不太可能了,当然老板建议用巢式试试,不过我感觉并不是含量不够或是特异性不好的原因,而是在于反转录这步本身就没有目的片段出现,所以后面的PCR都是无用功.老板娘则建议用更好的反转录酶试试.看来只有再试试了,希望能有公司送点好的反转录酶试用装来用用,比如基因公司的,呵呵.下次那公司的人来,想法问他要点试用装试试反转录咯~~~

最近采用了一个师弟的建议，使用touchdownPCR扩增一个高GC含量的片段。由于这个片段GC含量很高，引物不太好设计，采用普通PCR时总是有杂带（如图2号泳道），而提高退火温度后，条带效果很不理想。师弟建议使用touchdown方法，其原理主要是先在一个较高的退火温度下产生特异的条带，然后慢慢降低退火温度以便有效的合成目的条带。在网上查了一些相关的例子后，采用了从63到52递降，每两个循环降一度的方法，在52度14个循环合成完毕，结果出来的效果非常理想（如图4号泳道）。不过一般的PCR没有必要这样做，毕竟这样可能会影响合成量。

看来做了这么久克隆，对于基本的方法仍然了解的很少，还是这个师弟比较强啊，可惜不再合作了，多亏他的建议才能将这个条带顺利的合成，希望下次还能继续交流。